Question

【題目】H1NI為單鏈RNA病毒，感染人類會引發(fā)甲型流感。對H1N1進行基因組測序，發(fā)現(xiàn)HA基因是該病毒的一種特征基因�？赏ㄟ^檢測HA基因來檢測待測標本中H1N1的含量，過程如下圖所示�；卮鹣铝袉栴}。

（1）對H1N1進行基因組測序是測定RNA的__________序列。

（2）在過程①和②中，需分別向反應體系加入_________酶和____________酶。

（3）過程②中對HA基因對應的cDNA序列進行擴增，需設計_____種引物。反應體系中加入dATP、dTTP、dCTP和dGTP的作用是____________________。

（4）反應體系中含有熒光物質，每擴增形成一條DNA鏈，就會出現(xiàn)一定強度的熒光信號。現(xiàn)欲檢測兩個標本中H1N1的含量，可在熒光強度達到某一設定值時，觀察比較兩個反應體系擴增循環(huán)的次數(shù)，若某個標木的循環(huán)次數(shù)較少，則其H1N1含量較____________。

（5）檢測HA基因還可以采用分子雜交技術。制備用放射性同位素標記的、與A的基因互補的核酸序列作為_____與待測標本中提取的總RNA雜交，若觀察到_____，則表明標本中存在HA基因。

Answer 1

【答案】核糖核苷酸 逆轉錄 Taq 2 提供反應所需的原料和能量 多 探針 雜交帶

【解析】

核酸分為脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），核苷酸是核酸的基本單位。脫氧核苷酸是脫氧核糖核酸的基本單位，核糖核苷酸是核糖核酸的基本單位。脫氧核苷酸由堿基、脫氧核糖和磷酸構成。其中堿基有4種：腺嘌呤（A）、鳥嘌呤（G）、胸腺嘧啶（T）和胞嘧啶（C）。DNA雙鏈的堿基互補配對的原則為A－T、G－C。DNA在復制時，以親代DNA的每一個單鏈作模板，合成完全相同的兩個雙鏈子代DNA，每個子代DNA中都含有一個親代DNA鏈，這種現(xiàn)象稱為DNA的半保留復制。PCR是利用DNA在體外95℃高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60℃左右）時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72℃左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。

（1）RNA的基本單位是核糖核苷酸，因此對H1N1進行基因組測序是測定RNA的核糖核苷酸序列。

（2）過程①為逆轉錄，過程②為PCR，需分別向反應體系加入逆轉錄酶和Taq酶（DNA聚合酶）。

（3）dATP dGTP dTTP dCTP這四種都是都是合成DNA的原料。同時，它們所攜帶的高能磷酸鍵，也可以為反應提供能量。

（4）PCR擴增過程中每擴增形成一條DNA鏈，就會出現(xiàn)一定強度的熒光信號，隨著循環(huán)次數(shù)的增加，熒光信號逐漸積累，當達到設定的熒光強度時，PCR反應停止，此時可根據(jù)PCR擴增儀上顯示的循環(huán)次數(shù)，判斷病毒的含量。達到設定的熒光強度時的循環(huán)次數(shù)較少，待測標本中H1N1含量較多。

（5）分子雜交的原理是堿基互補配對，用放射性同位素標記的、與A的基因互補的核酸序列作為探針，若標本中存在HA基因（本質為RNA），則將標本中的RNA提取出來，就能找到與探針結合的雜交帶。